Immunoassay adalah metode bioanalitik dimana kuantifikasi analit bergantung pada reaksi antigen (analit) dan antibody. Immunoassay telah banyak digunakan di banyak bidang penting terutama di area riset dan analisis farmasi seperti diagnosis penyakit, pemantauan terapi obat, studi farmakokinetik klinis dan studi bioekuivalen dalam penemuan obat dan industry farmasi1. Beberapa jenis metode yang umum digunakan dalam immunoassay adalah ELISA dan Western Blot.
ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assays) adalah jenis immunoassay yang umum digunakan untuk mengkuantifikasi level target spesifik di dalam sampel. Sampel yang umum digunakan pada aplikasi ELISA meliputi serum, plasma, supernatant, sel kultur, lisat sel, saliva, lisat jaringan, dan urin. ELISA umumnya menggunakan kit ready-to-use atau manual coating dengan prinsip sandwich atau biasa dikenal dengan sandwich ELISA. Sandwich ELISA menggunakan 96-well microplates yang telah di coating dengan capture antibody spesifik terhadap analit yang ingin diukur. Selama masa inkubasi dengan sampel, standard, atau control, analit target akan ditangkap oleh antibody ini. Detection antibody yang terkonjugasi akan berikatan pada epitope berbeda pada analit target. Hal ini akan melengkapi kompleks sandiwich ELISA yang terbentuk. Larutan substrat ditambahkan untuk memproduksi sinyal yang proporsional dengan banyaknya analit yang berikatan. ELISA dapat memiliki format berbeda.
Gambar 1. Prinsip sandwich ELISA
(Gambar di ambil di https://www.rndsystems.com/resources/what-is-an-elisa-and-elisa-types)
Dalam pengerjaan ELISA, pemilihan reagent, target, alat pendukung, dan teknik pemipetan menjadi faktor kunci keberhasilan. Pemilihan reagent meliputi pemilihan kit (ready-to-use) atau masing-masing reagent untuk pengguna manual coating ELISA seperti pemilihan sample buffer, capture dan detection antibody, blocking buffer, jenis konjugat, jenis substrat, dan metode pencucian. Pemilihan alat pendukung meliputi jenis immunoplate yang digunakan, jenis pipette, dan jenis reader untuk deteksi/analisis hasil3. Di samping itu, teknik pemipetan sangat penting dalam ELISA dan berpegaruh terhadap persen error yang mungkin dihasilkan dalam pengerjaan.
PT. Elo Karsa Utama menyediakan produk yang mendukung lini pengerjaan ELISA immunoassay meliputi reagent Quantikine & DuoSet ELISA Kit dari brand R&D Systems, 96-well microplate untuk manual coating dari brand Nunc (Gambar 2), dan alat pendukung untuk pemipetan (E1-Cliptip), washing step ELISA (Wellwash Versa) dan analisis dengan menggunakan ELISA Reader (Multiskan sky) dari brand Thermo Scientific (Gambar 3).
Gambar 2. (a) R&D Systems Quantikine ELISA Kit Ready-to-use (b) R&D Systems DuoSet ELISA Kit Manual coating (c) Nunc Immunoplate & R&D Systems Antibody
Gambar 3. (a) Thermo Scientific Microwell Washer Wellwash Versa (b) Thermo Scientific Multiskan Sky with Touch Screen (c) Thermo Scientific Electronic Finnpipette E1-Cliptip Equalizer
Referensi
- Darwish, I.A. 2009. Immunoassay Method and their Applications in Pharmaceutical Analysis: Basic Methodology and Recent Advances. International Journal of Biomedical Science; 2(3): 217-235.
- https://www.rndsystems.com/resources/what-is-an-elisa-and-elisa-types
- Alhajj, Mandy and Farhana, Aisha. 2020. Enzyme Linked Immunosorbent Assay. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2020 Jan-.
